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细胞培养室的灭菌与消毒

2017/10/8 16:31:53??????点击:



细胞培养对无菌环境的要求较为严格。细胞培养间的杀菌主要涉及空气的杀菌,其常见的四种方法如下:


1、甲醛熏蒸

甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性,使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”,用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质,并且细胞培养实验室一般空气流通都很差,甲醛的排出也很慢,至少要一周以上。如果要紧急使用的话,在甲醛灭菌完后,可以用等量的氨水中和空气中的甲醛。


2、空气过滤(恒温恒湿装置)

这是一种最安全,杀毒效果也最好的方法,只是费用较为昂贵。衡量空气洁净度的级别标准如下表1。

表1 洁净室(区)空气洁净度级别表

洁净度级别 尘粒最大允许数/立方米 微生物最大允许数/立方米 浮游菌/立方米 沉降菌/皿

100级 3500 0 5 1

10000级 350000 2000 100 3

100000级 3500000 20000 500 10

300000级 10350000 60000 - 15


3、紫外线灯杀菌

紫外线灭菌是用紫外线管照射进行的。波长在220-300nm的紫外线称为“杀生命区”,其中以260nm的杀菌力最强。紫外线作用于细胞DNA,使DNA链上相邻的嘧啶碱形成嘧啶二聚体(如胸腺嘧啶二聚体),抑制了DNA复制。另外,空气在紫外线照射下可以产生臭氧,臭氧也有一定的杀菌作用。紫外线透过物质的能力很差,适用于空气及物体表面的灭菌,与被照物的距离以不超过1.2m为易,照射时间以紫外线灯管的功率大小、被照空间及面积大小,根据灭菌效果测定结果而定。由于上述各种情况的不确定性,导致紫外线杀菌效果不是很理想,一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用,不要在紫外线灯照射下进行操作。


4、电子消毒灭菌器杀菌

即臭氧灭菌。在高压电场作用下,电子管的内外电极发生强烈电子轰击,使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧在常温、常压下分子结构不稳定,很快自行分解成氧气(O2)和单个氧原子(O);后者具有很强的活性,能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应,从而靠氧原子的弥漫性扩散达到杀菌之目的,消毒时没有死角。消毒后空间的残留的多余氧原子只需30~40min则会自行重新结合成为普通氧原子(O2),不存在任何有毒残留物,故称无污染消毒剂,它不但对各种细菌(包括肝炎病毒,大肠杆菌,绿浓杆菌及杂菌等)有极强的杀灭能力,而且对杀死霉素也很有效。


此外,细胞培养间的地板也应定期使用新洁尔灭进行消毒灭菌,并打扫干净;培养箱、桌面定期用75%的酒精进行擦拭消毒,防止污染。


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